Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ / Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Биофармацевтический анализ антидотных свойств кальция фолината при высокодозной химиотерапии метотрексатом остеосаркомы у детей

Диссертация

Автор: Кошечкин, Константин Александрович

Заглавие: Биофармацевтический анализ антидотных свойств кальция фолината при высокодозной химиотерапии метотрексатом остеосаркомы у детей

Справка об оригинале: Кошечкин, Константин Александрович. Биофармацевтический анализ антидотных свойств кальция фолината при высокодозной химиотерапии метотрексатом остеосаркомы у детей : диссертация ... кандидата биологических наук : 15.00.02 / Кошечкин Константин Александрович; [Место защиты: Рос. ун-т дружбы народов] Москва, 2008 162 c. : 61 09-3/78

Физическое описание: 162 стр.

Выходные данные: Москва, 2008






Содержание:

 ОГЛАВЛЕНИЕ 
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ

Введение:
Цель и задачи исследования.9
Научная новизна исследования.10
Научно-практическая значимость исследования.11
Внедрение в практику.11
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.12
1.1. Высокодозная химиотерапия метотрексатом на фоне антидотной терапии кальция фолинатом остеосаркомы у детей.12
1.2. Механизм действия метотрексата и роль сопроводительной терапии кальция фолинатом.13
1.3. Токсические проявления метотрексата, купируемые введением кальция фолината. 14
1.4. Значение применения кальция фолината при высокодозной терапии метотрексатом 17
1.5. Химическое строение, фармакокинетические и фармакологические характеристики кальция фолината.19
1.5.1. Химическое строение и свойства кальция фолината.19
1.5.2. Фармакологическое действие кальция фолината.20
1.5.3. Роль фолиевой кислоты и ее производных в организме человека и их метаболизм.22
1.5.4. Способы применения и дозы кальция фолината.25
1.5.5. Препараты кальция фолината.27
1.6. Контроль качества препаратов кальция фолината по данным государственных фармакопей и НД производителей.29
1.6.1. Обзор государственных фармакопейных статей на субстанцию кальция фолитата.29
1.6.2. Обзор фармакопейных статей предприятий на лекарственные формы кальция фолитата.36
1.6.3. Мониторинг производных ФК в сыворотке крови.40
1.7. Мониторинг биохимических показателей крови.42
1.7.1.Некоторые клинические и молекулярные аспекты токсических осложнений
ВДХТМ1х.42
1.7.2. Биохимические показатели в оценке поражения печени при ВДХТ Mtx ОС у детей.44
1.8. Нарушение состояния антиоксидантной системы.52
1.8.1. Механизм возникновения свободных радикалов.53
1.8.2. Методики для определения активности АОС.57
1.9. Математическое моделирование биокинетики.59
Заключение по главе 1.62
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.64
2.1. Характеристика группы больных остеосаркомой и аспекты проводимой терапии .64
2.1.1. Характеристика группы больных остеосаркомой.64
2.1.2. Схема проведения химиотерапии больным остеосаркомой.65
2.1.3. Введение кальция фолината больным остеосаркомой.67
2.1.4. Клиническая характеристика результатов проводимой терапии.67
2.2. Методы определения лекарственных препаратов кальция фолината.69
2.2.1. Оборудование и реактивы.69
2.2.2. Стандартные образцы.69
2.2.3. Объекты анализа.70
2.2.4. Оценка хроматографических параметров.71
2.2.5. Расчет количественного содержания кальция фолината.71
2.3. Определение биохимических показателей крови при ВДХТ М1х остеосаркомы у детей.72
2.4. Определение показателей состояния антиоксидантной системы.75
2.4.1. Методика определения общего антиоксидантного статуса в сыворотке крови. 75
2.4.2. Методика определение активности супероксиддисмутазы в эритроцитах.77
2.4.3. Методика определение активности глутатионредуктазы.79
2.4.4. Методика определения активности у— глутамилтрансферазы.80
2.5. Определения кинетических параметров биохимических показателей крови.80
2.6. Статистическая обработка результатов.83
Заключение по главе II.84
3.1 Разработка методики определения кальция фолината.85
3.1.1 Подготовка стандартных растворов.85
3.1.2. Подбор оптимальных условий разделения кальция фолината и фолиевой кислоты.85
3.1.3. Выбор условий детектирования.89
3.1.4. Параметры разделения и метрологическая характеристика методики.90
3.2 Определение подлинности и содержания кальция фолината в инъекционных лекарственных формах.92
3.2.1 Подготовка проб для хроматографического анализа.92
3.2.2 Анализ лекарственных препаратов кальция фолината.92
3.2.3 Определение концентрации кальция фолината методом ВЭЖХ в сыворотке крови.96
3.3. Мониторирование биохимических показателей гепатотоксичности и их роль при проведении сопроводительной терапии кальция фолинатом.99
3.3.1. Динамика содержания общего белка и альбумина.100
3.3.2. Динамика содержания креатинина и мочевины.102
3.3.3. Динамика содержания кальция.105
3.3.4. Динамика содержания АСТ.105
3.3.5. Динамика содержания AJIT.108
3.3.6. Динамика содержания ЛДГ.111
3.3.7. Динамика содержания общего билирубина.114
3.3.8. Кинетические характеристики показателей гепатотоксичности.117
3.4. Показатели состояния антиоксидантной системы и их значение в проведении антидотной терапии кальция фолинатом.121
3.4.1. Результаты мониторинга показателей АОС.121
3.4.2. Биокинетика изменения показателей АОС при сопроводительной терапии кальция фолинатом.127
3.5. Применение препарата Гептрал совместно с кальция фолинатом.130
Заключение по главе 3.133
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.135
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.144
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.145
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ у-ГТ - у-глутамилтрансфераза
7-ОН-МТХ - 7-гидроксиметотрексат
ABGA — ^(п-фминобензоил)-Ь-глутаминовая кислота
Br.Ph. - Британская фармакопея
CaFol - кальция фолинат
Eur. Ph. - Европейская фармакопея
Mtx — метотрексат
РАВА - n-аминобензойная кислота
USP - фармакопея США
АК — аскорбиновая кислота
AJIT — аланинаминотрансфераза
АОК — антиоксидантный комплекс
АОС - антиоксидантная система
ACT — аспартатаминотрансфераза
АФК — активные формы кислорода в/в - внутривенно
ВД - высокие дозы
ВДХТ — высокодозная химиотерапия в/м - внутримышечно
ВМК — ванилминдальная кислота
ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения
ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография
ИФА - иммуноферментный анализ
JIB - лекарственное вещество
ЛДГ - лактатдегидрогеназа
ЛП - лекарственный препарат
ЛС - лекарственное средство
ЛФ - лекарственная форма
МДА — малоновый диальдегид
МСМ — молекулы средних масс
ОАОС — общий антиоксидантный статус
ОБ - общий билирубин
ОЛЛ - острый лимфобластный лейкоз
ОС - остеосаркома
ПОЛ - пероксидное окисление липидов ПХТ — полихимиотерапия ПЭ — полная эффективность СМЖ - спинномозговая жидкость СОД - супероксиддисмутаза
СПОЛ — свободнорадикальное пероксидное окисление липидов
СТ - сопроводительная терапия
ТБАГ - тетрабутиламмония гидроксид
ТБК — тиобарбитуровая кислота
ТЛМ - терапевтический лекарственный мониторинг
ТСХ - тонкослойная хроматография
ФК - фолиевая кислота
ФПИА - флуоресцентно поляризационный иммуноанализ ФФК - 10-формилфолиевая кислота ЦНС - центральная нервная система ЧЭ - частичная эффективность ЩФ — щелочная фосфатаза
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Создание и внедрение в клиническую практику эффективных противоопухолевых препаратов значительно расширило возможности воздействия на злокачественные опухоли детей. К сожалению, большинство из применяемых противоопухолевых препаратов обладают рядом существенных недостатков: низкой избирательностью действия, небольшой терапевтической широтой, токсическим действием на различные органы и системы организма, возникновением лекарственной устойчивости. Трудности и несовершенства метода полихимиотерапии (ПХТ) опухолей у детей диктуют необходимость изыскания не только новых оригинальных противоопухолевых препаратов, но и разработки оригинальных методик проведения лечения, включающих режимы и дозы их введения в организм. В последнее время в программном лечении онкологических заболеваний у детей стали применяться высокие дозы противоопухолевых препаратов [84, 124, 128, 131, 137, 152]. Это требует тщательного изучения их безопасности, фармакокинетики, фармакодинамики.
В настоящее время в мировой лечебной практике разработаны протоколы лечения онкологических заболеваний с максимальными дозами противоопухолевых препаратов, строго регламентированными периодами их проведения. Многие больные дети такой интенсивной терапии не выдерживают и их исключают из протокола лечения. По этой причине в последнее время начинает развиваться персонализированная медицина, которая подразумевает назначение конкретного противоопухолевого препарата конкретному больному на основании фармакокинетических и фармако-геномных сведений пациента. Назначение кальция фолината при высокодозной химиотерапии (ВДХТ) метотрексатом (Mix) является одним из аспектов индивидуального подхода к лечению [34, 111]. Применение кальция фолината на фоне лечения Mtx, когда дозы последнего многократно превышают стандартные, поддерживает нормальную жизнедеятельность клеток со сниженным уровнем фолатов и позволяет осуществлять антидотную терапию. Антагонисты фолиевой кислоты (ФК), главным из которых является ]Шх, занимают особое место среди противоопухолевых препаратов: с их помощью были получены первые полные ремиссии при лейкозах [19, 23,]. Интерес к антагонистам ФК еще больше повысили достижения ВДХТ в сочетании с кальция фолинатом, снижавшим токсичность препаратов. Благодаря этому расширился спектр противоопухолевой активности МЪс, теперь его назначают при остеосаркоме (ОС), на которую препарат в стандартных дозах не действовал. Оптимальная схема введения ВД М1х в сочетании с кальция фолинатом при ОС до сих пор не разработана. ВДХТ МЪс чревата тяжелыми побочными эффектами, лечение должно проводиться под строгим контролем многих лабораторных показателей, в частности, терапевтического лекарственного мониторинга (ТЛМ) концентрации МЬс, по значениям которых определяется необходимая доза кальция фолината. Фактически, при ВДХТ М1х осуществляется "resque" - спасение кальция фолинатом. Успех лечения во многом зависит от качества кальция фолината, что повышает требования к его фармацевтическому анализу, независимо от источника поступления на отечественный фармацевтический рынок. В настоящее время в РФ действует 7 регистрационных удостоверений- на препараты кальция фолината. Выбор наиболее безопасного и эффективного из них, безусловно, является актуальной и важной задачей, решение которой позволит снизить токсические эффекты ВДХТ М1х. Анализ этих ЛС в условиях детской онкологической клиники, модификация существующих и разработка новых аналитических методик позволит повысить эффективность спасительной терапии кальция фолинатом [35].
Высокая отсроченная токсичность МЪс является серьезным ограничением в достижении максимального лечебного действия, что в большинстве случаев обусловливает возникновение у больных серьезных побочных эффектов со стороны различных органов и систем. Проявление гепато- и нефротоксичности служат показанием для прерывания, и даже прекращения эффективного лечения, приводя к повышению частоты рецидивов основного заболевания. При ВДХТ исключительно большое значение имеют адаптивные и компенсаторные системы организма, способствующие мобилизации защитных потенциалов - это состояние антиоксидантной системы (АОС), обеспечивающее резистентность организма в процессе экстремального воздействия.
Разработка методологических подходов к диагностике и мониторингу токсичности ВД Mtx на основе комплекса биохимических методов исследования и контроль детоксикационного действия проводимой сопроводительной терапии на основе биокинетических подходов является одной из актуальных задач детской онкологии [19]. Следует отметить, что в литературе отсутствуют работы, посвященные изучению биохимических маркеров токсичности, не разработан алгоритм обследования и дозы кальция фолпната при проведении ВДХТ Mtx. В этом аспекте очевидна актуальность проведенного комплексного исследования.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования является разработка методики количественного определения кальция фолината в инъекционных лекарственных препаратах (ЛП) различных фирм-производителей методом ВЭЖХ и биокинетическая оценка антидотной активности кальция фолината при ВДХТ Mtx остеосарком у детей.
Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
1. Разработать методику количественного определения кальция фолината в инъекционных ЛП и в сыворотке крови методом ВЭЖХ.
2. Провести сравнительную оценку качества инъекционных препаратов кальция фолината различных фирм-производителей.
3. Оценить влияние кальция фолината на показатели гепатотоксичности на различных курсах лечения. Рассчитать биокинетические параметры восстановления показателей гепатотоксичности на основе их длительного мониторинга при проведении ВДХТ М1х у детей с ОС.
4. Изучить состояние АОС (показатели активности СОД, ГР и ОАОС) и оценить их взаимосвязи с токсическими осложнениями. Рассчитать биокинетические параметры изменения состояния АОС на основе длительного мониторинга ее показателей при лечении ОС у детей ВДХТ ]Шх.
5. Провести сравнительное исследование биохимических показателей (гепатотоксичности и состояния АОС) на фоне применения вспомогательного гепатопротектора - «Гептрала»).
Научная новизна исследования
Разработана унифицированная экспресс-методика определения (метод ВЭЖХ) кальция фолината в ЛФ и сыворотке крови (модельные системы). Несколько серий препаратов разных производителей качественно и количественно охарактеризованы.
Впервые проведена оценка антидотной активности кальция фолината при ВДХТ М1х ОС детей на основе длительного мониторирования биохимических показателей крови — маркеров гепатотоксичности, нефротоксичности, водно-электролитного и кислотно-основного баланса.
Впервые количественно охарактеризовано изменение состояния ферментов АОС при терапии ВД М1х ОС детей и проведена оценка их взаимосвязи с токсическими осложнениями.
Впервые рассчитаны биокинетические параметры показателей гепатотоксичности и состояния АОС.
Научно-практическая значимость исследования
Разработана и внедрена в ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН методика определения кальция фолината в ЛП разных фирм-производителей и сыворотке крови.
Проанализировано соответствие декларированных показателей качества фактическим для зарегистрированных на отечественном рынке и применяемых в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН препаратов кальция фолината. Выданные рекомендации по предпочтительному использованию одного из препаратов позволят улучшить показатели выживаемости и качество жизни у исследуемой категории пациентов.
На основании проведенной биокинетической оценки биохимических показателей крови (константа скорости и период полувосстановления до нормы) даны рекомендации по периодичности сопроводительной терапии.
На основании установленных изменений активности ферментов АОС при ВДХТ Mtx рекомендована сопутствующая антиоксидантная терапия.
Внедрение в практику
Экспресс-метод определения содержания кальция фолината и примесей в ЛП внедрен в ГУ РОНЦ им. Н:Н. Блохина РАМН.
Рекомендации по сопроводительной терапии на основе анализа ЛП кальция фолината различных фирм-производителей, биокинетические исследования показателей гепатотоксичности и состояния АОС больных ОС применяются в ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН.
Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН.