Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ / Патология, онкология и морфология животных

Морфофункциональные изменения эритроцитов крови при патологиях печени у мелких домашних животных

Диссертация

Автор: Сысуева, Анна Витальевна

Заглавие: Морфофункциональные изменения эритроцитов крови при патологиях печени у мелких домашних животных

Справка об оригинале: Сысуева, Анна Витальевна. Морфофункциональные изменения эритроцитов крови при патологиях печени у мелких домашних животных : диссертация ... кандидата ветеринарных наук : 16.00.02 / Сысуева Анна Витальевна; [Место защиты: Моск. гос. ун-т приклад. биотехнологии] - Москва, 2009 - Количество страниц: 130 с. ил. Москва, 2009 130 c. :

Физическое описание: 130 стр.

Выходные данные: Москва, 2009






Содержание:

ВВЕДЕНИЕ
I ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОРВ
11 Система эритрона
12 Методы измерения параметров эритроцитов (существующие экспериментальные решения)
121 Оптическая микроскопия
122 Турбидометрические измерения на ансамбле клеток
123 Спектрофотометрический метод
124 Проточная цитометрия
125 Метод двухуглового рассеивания
126 Кондуктометрический метод
13 Патогенез изменения системы эритрона при заболевании печени
14 Морфологические изменения эритроцитов и внутренних органов при заболеваниях печени
141 Морфология эритроцитов
142 Пато л ого анатомическая картина заболеваний печени
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
31 Клинический осмотр животных
32 Результаты биохимического исследования крови
33 Результаты ультрасонографического исследования печени собак
34 Результаты ультрасонографического исследования печени кошек
35 Результаты гистологического исследования биоптатов печени собак
36 Результаты гистологического исследования биоптатов печени кошек
37 Результаты клинического анализа крови у собак
371 Острый токсический гепатит
372 Гепатоз
373 Цирроз печени
Атрофический и гипертрофический цирроз печени
Билиарный цирроз печени
374 Изменения некоторых параметров эритрона в зависимости от тяжести поражения печени
38 Результаты клинического анализа крови у кошек
381 Холангиогепатит
382 Липидоз
39 Морфология эритроцитов при патологиях печени у собак и кошек
IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение:
По данным отечественных и зарубежных авторов внутренние незаразные болезни составляют основную часть заболеваний собак и кошек - около 41 %, среди которых болезни печени составляют около 5 %. Наиболее часто встречаемыми патологиями печени у собак являются острый гепатит, хронический гепатит и множественные новообразования* печени, у кошек - острый гепатит, липидоз и метаплазия (Уша Б.В., Беляков И.М., 1998; Денисенко В.И., Кесарева Е.А., 2006).
Патология пищеварительной системы продолжает оставаться одной из наиболее актуальных проблем теоретической и практической ветеринарной медицины. Несмотря на большие успехи в. профилактике, диагностике, специализированном лечении, болезни печени остаются тяжелыми заболеваниями, нередко приводящими к падежу животных. Заболевания печени сопровождаются изменениями в различных органах и системах, среди которых особое место занимает система крови. Тесная взаимосвязь печени с процессом гемопоэза обусловливается ее ведущим значением в обмене важнейших гемопоэтических факторов: железа, витамина Bi2, фолиевой кислоты, эритропоэтина и других. Механизм возникновения гематологических нарушений при заболеваниях печени сложен и его изучение имеет существенное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных с заболеваниями печени. Проведение подобных исследований по выяснению клинико-гематологических параллелей при- острых и хронических заболеваниях печени во многом способствует более углубленному пониманию патогенеза и послужит основанием для дифференциальной диагностики, профилактики и эффективного лечения.
Новый уровень методических приемов потребовал пересмотра и углубления наших знаний о сущности и динамике патологических процессов в организме, ликвидации разрыва между так называемыми "функциональными" изменениями и морфологическими, "органическими повреждениями" ткани в процессе становления и развития болезни. Поэтому одной из основных задач теоретической ветеринарии* является изучение ранних морфофункциональных изменений в организме, отражающих начальные этапы- становления, патологического процесса; выяснение характера и динамики патологических изменений органов и тканей в течение болезни, выявление связей* между характером морфологических и функциональных изменений органов и показателей крови. С целью оценки и повышения эффективности тех или иных лечебно-профилактических мероприятий возникает необходимость морфологического контроля за биологическими процессами в организме животных (ЖаровsA.B'., Жарова Ю.П., 2006). Несомненно, что детальное прижизненное- изучение морфогенеза должно служить- подспорьем в клинической практике при решении* вопросов диагноза и прогноза болезни.
Клетки крови, будучи важнейшими компонентами внутренней среды организма, чутко реагируют на различные физиологические иг патологические процессы в организме; что позволяет использовать изменения крови в качестве дифференциально-диагностического теста при самых разнообразных нозологических формах. Применение в этих целях более тонких и чувствительных методов исследования позволяет дифференцированно подойти к изменениям в системе крови при заболеваниях печени. В свете вышеизложенного становится очевидной актуальность и своевременность, дальнейших комплексных исследований крови и кроветворения при патологиях печени в научных и практических целях.
Цель исследования выявить закономерности морфофункциональных изменений эритроцитов крови при различных патологиях печени мелких домашних животных.
Задачи исследования
1. Оценить морфофункциональное состояние эритроцитов крови и особенности его изменения у животных с различными заболеваниями печени.
2. Определить нозологический профиль болезней печени собак и кошек.
3. Провести анализ корреляционной зависимости между морфофункциональными показателями эритроцитов крови и патоморфологической картиной поражения печени у собак и кошек.
Научная новизна
1. Впервые детально показаны возможности использования морфометрии эритроцитов для оценки функционального состояния печени
2. Выявлены новые закономерности изменения эритроцитарной системы периферической крови у животных с заболеваниями печени в зависимости от стадии и степени поражения.
Практическое значение
Установлено, что при поражении печени в патологический процесс вовлекается и система крови, что существенно влияет на течение заболевания и должно учитываться при установке прогноза и назначении лечения.
Материалы исследования помогут более полно оценивать состояние животных с заболеваниями печени и могут служить методологической основой для применения системного анализа в лабораторной практике ветеринарных клиник.
Исследования общего клинического аназиза крови, наработка данных и умение их интерпретировать позволят быстро проводить первичное обследование большой группы животных, получать точные данные о составе и функциональной активности клеток крови, выявлять скрытые заболевания и начальные стадии заболеваний, при которых клинические признаки еще не успели развиться, а также позволят прогнозировать развитие и исход многих болезней.
Материалы и результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре незаразных болезней животных Московского государственного университета прикладной биотехнологии.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Морфофункциональные изменения эритроцитов крови собак и кошек при различных гепатопатиях
2. Морфологические характеристики патологий печени собак и кошек
3. Биохимические изменения в организме собак и кошек при некоторых заболеваниях печени
Апробация работы
Материалы исследования доложены на конференциях:
1. Конференция молодых ученых и студентов "Живые системы и биологическая безопасность населения" (МГУПБ 2006, 2007, 2008 гг.)
2. XV Международный Московский ветеринарный конгресс (2007 г-)
3. VII Всероссийская выставка научно-технического творчества молодежи (Москва, 2007 г.)
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК.
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1. Система эритрона
Впервые понятие эритрона предложил в 1913 г. A. Boycott, выделив красные клетки в специфическую ткань организма. В 1929 г. автор высказал мнение, что эритрон включает в себя циркулирующие эритроциты крови и костный мозг. По современным представлениям эритрон является одной из важнейших систем кроветворной ткани, происходит от плюрипотентной стволовой клетки, включает в себя ранние предшественники эритроидного ряда, но не чувствительные к эритропоэтину; эритропоэтинчувствительные клетки; морфологически идентифицируемые, синтезирующие гемоглобин ядросодержащие клетки (пролифирирующие и непролифирирующие); ретикулоциты и зрелые эритроциты (Козинец Г.И., Быкова И.А., 1983).
Основной функцией системы эритрона является продукция и поддержание на достаточном уровне общей массы эритроцитов, содержащих важнейший дыхательный пигмент — гемоглобин. Эритропоэз как гемопоэз в целом является одной из самоподдерживающихся систем организма, в котором, наряду с образованием необходимого числа ядросодержащих эритроидных клеток с последующим вызреванием их в эритроциты, происходят процессы старения и гибели клеток. Разрушению подвергаются как старые, функционально неполноценные эритроциты, так и часть ядросодержащих клеток костного мозга (Козинец Г.И. с соавт., 1976; Finch С. et al., 1977). Процесс внутрикостномозгового лизиса эритроидных ядросодержащих клеток носит название неэффективного эритропоэза. В более широком смысле под неэффективным эритропоэзом, кроме разрушения эритробластов, понимают также еще и выход в периферическую кровь неполноценных эритроцитов (Козинец Г.И., Быкова И.А., 1983).
Характерной чертой популяции эритрона является ее пространственная неоднородность. Зрелые клетки циркулируют в крови, а пролиферация, дифференциация и созревание их происходит в кроветворных органах (Bessis М., 1978).
Формирование распределения клеток по параметрам
Распределение клеток по возрасту
Современная гематологическая техника позволяет измерять не только средние величины параметров популяции клеток, но и распределения по параметрам. Детальный анализ популяции эритроцитов показывает, что* даже в норме эритроциты одного организма не являются полностью подобными друг другу ни морфологически, ни биохимически (Rettig М.Р., Low P.S., Gimm J.A., Mohandas N., Wang J. and Christian J.A., 1999). Уже на стадии созревания клетки ^ имеют естественное распределение по объему w по концентрации гемоглобина (Lew V.L., Raftos J.E., Sorette М., Bookchin R.M. and Mohandas N., 1995). Время жизни зрелого-эритроцита в кровяном русле'у всех животных составляет около 120 дней, в течение которого клетка "записывает" состояние организма.
Существует несколько естественных маркеров, по которым отличают старые эритроциты от молодой популяции.
По некоторым данным у эритроцита мыши к концу жизни в кровотоке увеличивается отношение молекул белка полосы 4,1 а/4,lb от 0,3 до 1,0 и более (Mueller T.J., Jackson C.W., Dockter М.Е. and Morrison M., 1987). По другим данным более надежным маркером возраста является отношение 4,la/(4,la+4,lb) (Lasch J., Kullertz G. and Opalka J.R., 2000). Методом биотинилирования in vivo эритроцитов собаки было показано, что данный параметр пригоден только для идентификации молодых клеток и принимает максимальные значения в середине жизни клеток.
Процентное содержание устойчивой фракции гликозилированного гемоглобина (HbAlc) в клетке по отношению к общему содержанию гемоглобина (HbAl) также нередко используется как возрастной маркер.
В процессе неферментативного образования гликозилированного гемоглобина на протяжении всей жизни эритроцита, который in vivo можно считать необратимым, процентная доля HbAl возрастает с 9,5 до 17 %. Существует эмпирическая формула, связывающая процентное содержание HbAlc с концентрацией глюкозы в крови, использующаяся для контроля среднего уровня глюкозы в крови за предыдущий месяц при диабете.
С возрастом на мембране клетки идет кластеризация белка полосы 3. При этом каждый кластер служит посадочным местом для IgG, выполняя роль так называемого "антигена зрелости", по которому макрофаги распознают зрелые клетки и удаляют их из кровотока (Singer J.A., Jennings L.K., Jackson C.W., Dockter M.E., Morrison M. and Walker W.S, 1986).
Помимо этого, с возрастом в клетках происходят неспецифические изменения. Увеличивается плотность эритроцитов, что иногда служит приблизительным маркером зрелости. Возможно, как следствие уплотнения клеток, изменяется концентрация ионов и неорганических элементов: концентрация К , С1 уменьшается, Са и серы увеличивается. |
Концентрация Na и Mg остается неизменной (Cameron I.L., Hardman W.E., Smith N.K., Fullerton G.D. andMiseta A., 1993).
Распределение клеток no индексам
Для эритроцита типичными измеряемыми морфологическими параметрами (индексами) являются показатель преломления, который практически полностью определяется концентрацией гемоглобина, и объем. г
Значения гематологических индексов монотонно меняются для индивидуальной клетки в ходе ее жизни в кровотоке. Поэтому при исследовании любого нового параметра (содержание ионов, маркеров возраста клетки и т.п.) традиционным является обсуждение его качественной зависимости от гематологических индексов.
Постановка вопроса о происхождении и описании распределения эритроцитов по индексам концентрацией гемоглобина и объема в норме делалась неоднократно разработчиками гематологических анализаторов. В результате был сделан качественный вывод, что распределение складывается из соответствующих уширений в процессах рождения и созревания клеток, природа и величина которых неизвестны до настоящего времени. Просуммируем факты, известные из литературы.
Эритроциты здоровых индивидуумов схожи между собой по форме и отличаются по размеру. При рождении? распределение эритроцитов по объему близко к логнормальному (McLaren С.Е., Brittenham G.M. and Hasselblad V., 1986) и, по-видимому, такое распределение характерно не только для эритроцитов, но и для многих других клеток. "Логнормальность" распределения обусловлена механизмом деления (в данном случае — стволовых предшественников, из которых образуются эритироциты и другие клетки): комбинация»мультипликативного процесса деления и гауссова распределения доли объемов пары клеток, получающихся в результате деления.
Однако макроскопическая схема жизни и старения клеток разных видов разная, эритроциты человека, собаки и лошади имеют схожую продолжительность существования в кровеносной системе (110-120 дней), малую вероятность случайного элиминирования, эритроциты мыши и кролика существенно меньше по объему (до полутора раз), чем эритроциты собаки и кошки, имеют схожий индекс сферичности, меньшее время жизни (50-60 дней), высокий процент случайных потерь около 0,5 % в день (т.е. порядка 30 % на протяжении жизни).
В работе П.А. Тарасова (2002) выделено две фазы в процессе старения эритроцита. Такое разделение до сих пор никем не проводилось, но в пользу него свидетельствует набор косвенных фактов. Рассмотрим их подробнее.
В работе (Rettig М.Р., Low P.S., Gimm J.A., Mohandas N., Wang J. and Christian J.A., 1999) посредством биотинилирования эритроцитов собаки in vivo с последующим выделением через интервалы времени на магнитных бусах, меченых авидином, было показано, что появление связанного мембраной мономера гемоглобина и возрастание поверхностно связанного IgG происходит после около 80 дней нахождения клетки в русле.
Используя разделение клеток комбинацией методов центрифугирования, в работе (Willekens F.L., Bosch F.H., Roerdinkholder-Stoelwinder В., Groenen-Dopp Y.A. and Werre J.M., 1997) приведены зависимости основных индексов от процентного содержания фракции HbAlc в клетке. Из приведенных данных на качественном уровне видно, что в первой половине жизни объем эритроцита уменьшается, но количество гемоглобина в клетке остается постоянным, концентрация гемоглобина растет. Во второй половине жизни объем продолжает уменьшаться, концентрация гемоглобина слабо растет, оставаясь почти постоянной.
Таким образом, на протяжении всей жизни происходит уплотнение клетки. В первой части жизни клетки процесс идет без потери гемоглобина, затем появляются нарушения в мембране, и начинается процесс образования везикул, которому сопутствует выход гемоглобина из клетки.
С возрастом клетки возрастает степень ее сферичности. Площадь клетки уменьшается посредством везикуляции. Состав гемоглобина везикул напоминает таковой у старых клеток.
Во второй части жизни (80-120 дней) объем уменьшается примерно на 10 %, полное количество гемоглобина (Hbz — сумма нормального и гликозилированного) уменьшается, концентрация гемоглобина слабо растет или постоянна, площадь эритроцита уменьшается, суммарное количество гликозилированного гемоглобина примерно постоянно, возрастает число посадочных мест IgG примерно до 150-200. После чего старый эритроцит распознается макрофагами и уничтожается иммунной системой.
Способам обработки данных, получаемых на гематологических анализаторах, посвящена серия работ математиков. Основное развиваемое направление - диагностика анемии по анализу распределений на двумерной карте измеряемых индексов. При этом никаких предположений о функции распределения в норме' и патологии не делается, а анализ ведется из «общих соображений» по методу Байеса. Эта задача- остается предметом обсуждения и по сей день (Catlin S.N., Abkowitz J.L. and Guttorp P., 2001).