Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ / Биотехнология

Получение и анализ трансгенных растений пшеницы (Triticum aestivum L.) с агробактериальным геном изопентенилтрансферазы (ipt)

Диссертация

Автор: Терешонок, Дмитрий Викторович

Заглавие: Получение и анализ трансгенных растений пшеницы (Triticum aestivum L.) с агробактериальным геном изопентенилтрансферазы (ipt)

Справка об оригинале: Терешонок, Дмитрий Викторович. Получение и анализ трансгенных растений пшеницы (Triticum aestivum L.) с агробактериальным геном изопентенилтрансферазы (ipt) : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.23 / Терешонок Дмитрий Викторович; [Место защиты: Всерос. науч.-исслед. ин-т с.-х. биотехнологии РАСХН] - Москва, 2009 - Количество страниц: 134 с. ил. Москва, 2009 134 c. :

Физическое описание: 134 стр.

Выходные данные: Москва, 2009






Содержание:

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ -
11 Влияние переувлажнения почвы на растения -
12 Механизмы адаптации растений к анаэробному стрессу -
121 Морфолого-анатомические приспособления растений к анаэробному стрессу -
122 Метаболическая адаптация растений к гипоксии и аноксии -
13 Гормональная регуляция при гипоксии и аноксии -
14 Образование активных форм кислорода при анаэробном стрессе- -
15 Биотехнологические подходы создания устойчивых к анаэробному стрессу растений -
151 Клеточная селекция -
152 Генетическая инженерия -
16 Методы, применяемые при получении трансгенных растений пшеницы -
161 Поглощение ДНК протопластами пшеницы -
162 Электропорация -
163 Баллистическая трансформация пшеницы\ -
164 Агробактериальная трансформация пшеницы -
17 Фитогормоны -
18 Общая характеристика цитокининов -
181 История открытия -
182 Химическая структура и функции -
183 Биосинтез цитокининов -
1831 Прямой путь биосинтеза цитокининов -
1832 Биосинтез цитокининов из тРЬЖ -
184 Метаболизм цитокининов в растениях -
1841 Конъюгация цитокининов в растении -- -
1842 Разрушение цитокининов в растениях -
19 Получение трансгенных растений с геном ipt -
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ -
21 Растительный материал -
22 Среды для культивирования растений и растительных тканей -
23 Получение каллуса и регенерация растений пшеницы -
24 Характеристика вектора для трансформации -
25 Среды и условия для культивирования агробактерии -
26 Методы молекулярной биологии -
261 ПЦР-атализ ДНК трансгенных растений -
262 Анализ транскрипции генов методом ОТ-ПЦР -
263 Гибридизация ДНК по Саузерну -
27 Определение содержания МДА -
28 Определение активности супероксиддисмутазы -
29 Определение активности каталазы -
210 Статистическая обработка результатов -
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ -
31 Получение трансгенных растений пшеницы -
311 Обоснование выбора экспланта для трансформации -
312 Подбор оптимальной концентрации селективного агента -
313 Освобождение от бактериальной инфекции -
314 Выбор оптимальной схемы агробактериальной трансформации -
32 Анализ трансформированных растений -
33 Морфологические особенности трансгенных растений -
34 Изучение наследования встроенных генов -
35 Анализ транскрипции введенных генов -
36 Анализ устойчивости трансгенных растений пшеницы в условиях корневого затопления -
361 Создание условий корневого затопления -- -
362 Анализ воздействия корневого затопления на рост и развитие растений -
363 Активность антиоксидантной энзиматической системы в растениях пшеницы в условиях корневого затопления -
37 Изучение морфогенетического потенциала каллусных линий, полученных от трансгенных растений пшеницы с геном ipt -

Введение:
Актуальность проблемы. Пшеница является ведущей продовольственной культурой в мире, в том числе и на территории Российской Федерации. Фактическая урожайность современных сортов пшеницы во многом лимитируется воздействием абиотических и биотических стрессов. Одним из распространенных абиотических стрессов на территории России является затопление полей, происходящее в весенний и осенний периоды, а тао[<е в периоды зимних оттепелей. Затопление полей ливневыми и паводковыми водами приводит к почвенной гипоксии, которая является причиной преждевременного старения растений (Dong et al., 1983), приводит к хлорозу листьев, некрозам, дефолиации (Ginkel et al., 1992), прекращению роста (Huang and Johnson, 1995) и уменьшению урожая (Musgrave, 1994, Вош, 1996).Так в среднем в мире ежегодно подвергаются затоплению 20% площади, используемой для возделывания пшеницы (Setter, T.L., Waters, L, 2003). В результате потеря урожая на затапливаемой территории составляет от 34 до 60%, в основном, за счет уменьшения массы и количества зерна (Setter, T.L., Waters, 2003; Musgrave Т., М.Е., Ding N, 1998).Известно, что за формирование устойчивости у растений к таким неблагоприятным факторам как засоление, недостаток или избыток влаги отвечает множество различных генов и регуляторных систем (Agarwal and Grover, 2006). С развитием генетической инженерии стало возможным изучение механизмов стрессового ответа путем манипуляции с единичными генами, не затрагивая другие характеристики растений. Благодаря этому можно оценить вклад конкретных признаков в формирование комплексного механизма устойчивости растений к различным стрессам окружающей среды.В литературе имеются данные о положительном влиянии экзогенных цитокининов при затоплении растений (Бахтенко, Платонов, 1999), в связи с - 5 -чем, Zhang et al. (2003) было выдвинуто предположение, что повышение уровня эндогенных цитокининов должно улучшать выживаемость растений в условиях затопления. Создание трансгенных растений с измененным уровнем цитокининов при встраивании в растения гена ipt, кодируюш,его изопентенилтрансферазу - ключевого фермента синтеза цитокинина, почвенной бактерии Agrobacterium tumefaciens, могло бы изменить устойчивость растений к почвенной гипоксии и послужить удобной моделью для изучения роли этого гормона в защитных реакциях растений на затопление.Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось получение и анализ трансгенных растений пшеницы с геном изопентенилтрансферазы {ipt).Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 1. Разработать метод агробактериальной трансформации пшеницы.2. Получить трансгенные растения пшеницы с агробактериальным геном биосинтеза цитокининов ipt.3. Исследовать морфологические особенности полученных растений.4. Провести анализ экспрессии и наследования введенных генов, 5. Исследовать устойчивость полученных трансгенных растений к корневому затоплению.6. Изучить морфогенетический потенциал каллусных линий, полученных от трансгенных растений пшеницы с геном ipt.Научная новизна работы. Разработан новый способ агробактериальной трансформации пшеницы in planta с использованием в качестве растительного экспланта прорастающих семян. С применением данного метода были впервые получены трансгенные растения пшеницы, содержащие и экспрессирующие агробактериальный ген ipt. Впервые для пшеницы было показано влияние введенного гена ipt на устойчивость растений к воздействию корневого затопления. Изучена динамика процессов перекисного окисления липидов у трансгенных растений пшеницы в условиях затопления. Проведено исследование морфогенетического потенциала у каллусных линий, полученных от трансгенных растений пшеницы с геном ipt. - 7 -