Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ / Молекулярная биология

Прионные и неприонные амилоиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Диссертация

Автор: Вишневская, Александра Борисовна

Заглавие: Прионные и неприонные амилоиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Справка об оригинале: Вишневская, Александра Борисовна. Прионные и неприонные амилоиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03 Б.м., Б.г. 161 c. : 61 07-3/57

Физическое описание: 161 стр.

Выходные данные: Б.м., Б.г.






Содержание:

4 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Прионы млекопитающих
11 История открытия прионного белка РгР
12 Доказательства нрионных свойств белка РгР
13 Свойства белка РгР и его прионной изоформы РгР*
14 Молекулярные механизмы приопного перехода
15 Существование межвидового барьера Штаммы прионов
2 Амилоиды и амилоидозы
21 Амилоидозы человека
22 Структура амилоидных фибрилл
23 Любой ли белок может стать амилоидом?
24 Чем обусловлено различие в инфекционности прионов и амилоидов?
3 Прионы низших эукариот
31 Цитоплазматический детерминант [HET-s] гриба Podospora anserina
32 Нехромосомный детерминацт [иЯЕЗ] дрожжей Saccharomyces cerevisiae
33 Детерминант [PSt\ генетические проявления и молекулярная основа
331 Доказательства прионных свойств Siip
5 Изучение прионного перехода белка Sup35 in vitro
332 Структура и функции белка Sup
333 Прионный домен Sup35: роль аминокислотного состава и олигопептидных повторов в определении прионных свойств
334 Двухуровневая структура прионных агрегатов Sup
34 Нехромосомпый детерминант [PIN] дрожжей Saccharomyces cerevisiae
35 Роль шаперопаПэр в поддержании {PSf}
36 Варианты [Z/]
37 Феномен мультикопийной супрессии
4 Исследование болезни Хантингтона в дрожжевой системе
41 Факторы, влияющие па агрегацию полиглутаминовых белков
411 Зависимость агрегации от экспрессии и количества остатков глутамина
412 Взаимодействие шаперонов с нолиглутаминовыми белками
413 Способность прионных и амилоидных белков инициировать полимеризацию гетерологичных белков
5 Биологическое значение и распрострапенность в природе прионов и амилоидов
6 Заключение Постановка задачи исследования МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1 Среды, штаммы, условия культивирования
2 Генетические методы Трансформация микроорганизмов
3 Конструирование плазмид и другие генно-инженерные манипуляции
4 Определение эффективности сквозного прочтения нонсенс-кодонов в клетках дрожжей
5 Флуоресцентная микроскопия
6 Экспрессия в Е соИ и аффинная очистка белка -Rnql-Hise
7 Получение и очистка антител к белку Rnql
8 Приготовление и фракционирование дрожжевых лизатов
9 Белковый гель-электрофорез, иммуноблоттинг
0 Прионный переход белка Sup35 in vitro
1 Выделение амилоидных полимеров белка Sup3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЕ АМИЛОИДНОГО СОСТОЯНИЯ БЕЛКА SUP
11 Большая часть белка Sup35 при его сверхпродукции в клетках [psi][PIN] находится в амилоидной форме
12 Нолимеры белка Sup35 содержат Rnql
13 Агрегация белка Sup35 приводит к супрессии нонсенс-мутаций
2 ИЗУЧЕНИЕ ПРИОННЫХ И АМИЛОИДНЫХ СВОЙСТВ ГИБРИДНЫХ НОЛИГЛУТАМИНОВЫХ БЕЛКОВ
21 Нолимеризация гибридного белка Q66-Sup35MC ненаследуема
22 Нолиглутаминовые и полиглутамин/тирозиновые последовательности длиной более остатков полимеризуются/и vivo
23 Влияние шаперона HsplO4 на полимеризацию полиглутаминовых белков
24 Способность белков polyQ к полимеризации в клетках Arnql зависит от длины полиглутаминовой последовательности
25 Кополимеризация полиглутамин-содержащих белков с другими глутаминбогатыми белками ОБСУЖДЕНИЕ
1 Свойства неприонных амилоидов белка Sup
2 Белки polyQ и polyQY эффективно образуют полимеры in vivo
3 Нолимеры белков polyQ фрагментируются и могут быть прионами
4 Добавление тирозиновых остатков улучшает фрагментацию полиглутаминовых полимеров
5 Фрагментация полимеров polyQY в отсутствие HsplO
6 Взаимное ускорение полимеризации между различными амилоидогенными белками
7 Межвидовой барьер в передаче прионного состояния
8 Нрионы и неприонные амилоиды: два типа наследования (ноддержапия)
Заключение ВЫВ0ДБ1 СНИС0КЛИТЕРАТУРБ

Введение:
Более 20 болезней человека связаны с аномалиями в формировании пространственной структуры белков, что приводит к образованию амилоидов, представляющих собой агрегаты фибриллярной структуры, состоящие из растворимых в норме клеточных белков. Такие заболевания называют амилоидными или амилоидозами. Из амилоидозов наиболее известны болезни Альцгеймера и Паркинсона, весьма распространенные среди пожилого населения развитых стран. Значительное количество данных указывает на то, что к амилоидозам относятся и прионные заболевания. В отличие от прочих амилоидозов, прионные заболевания инфекционны. Уникальность нрионов состоит в том, что их инфекционность связана не с ДНК или РНК, а с белком. К нрионным заболеваниям относят болезнь Крейцфельда-Якоба, синдром Герстманна-Штраусслера-Шейнкера, куру, а также фатальную семейную бессонницу человека, скрейпи у овец и коз, бычью губчатую энцефалопатию (коровье бешенство), и другие энцефалопатии, встречающиеся у кошек, оленей и других животных. Все эти прионные болезни связаны с единственным белком, называемым РгР. Помимо животных и человека, белки с прионными свойствами были обнаружены у дрожжей Saccharomyces cerevisiae. У дрожжей «инфекционность» этих прионных белков проявляется как не-Менделевское наследование соответствующих фенотипов. Прионное состояние белка Sup35 дрожжей (фактор терминации трансляции eRF3) приводит к трансляционной супрессии нонсенс-кодонов. Этот фенотип, называемый [PSf], стабильно наследуется и передается всем потомкам при скрещивании или цитодукции (обмен клеток цитоплазмой). [PSf] может спонтанно возникать с низкой частотой и может теряться при росте на определенных средах, Молшо полагать, что феномен прионов амилоидов гораздо шире распространен в природе, чем это известно на сегодняшний день, и может быть использован в биологически значимых механизмах. Наличие белков с прионными свойствами показано не только а для дрожжей гриба S. cerevisiae, но а и для также Schizosaccharomyces pombe, также Podospora anserina, предположительно для улитки Aplysia californica. Для трансляционного регулятора СРЕВ, который играет ключевую роль в механизмах, связанных с долговременной памятью, были показаны прионоподобные свойства в дрожжах. Более того, у млекопитающих найдены амилоидные белки, выполняющие в норме важные физиологические функции. Так, было показано, что амилоидные полимеры белка Pmell7 являются матрицей для полимеризации предшественника меланина. Предшественник меланина токсичен, в то время как его полимеры защищают клетки от различных вредный воздействий, в частности, ультрафиолета и оксислительного стресса. Множество белков, структурно сходных с уже известными прионными белками у дрожжей, было выявлено у различных организмов ири поиске в банках генов. Это может говорить о том, что белки, способные формировать амилоидную структуру, широко распространены и могут играть важную роль в регуляции физиологических процессов в клетке. Вопросы о том, чем отличаются нрионы и амилоиды, и действительно ли они имеют принциниально сходную основу, достаточно значимы для данной темы. Это важно и для понимания особенностей прионных и амилоидных заболеваний, и для понимания свойств полезных механизмов связанных с амилоидами, и для выявления новых таких механизмов. Представленная здесь работа началась с наблюдения полимеров белка Sup35, по свойствам более близких к неинфекционным прионам, чем к амилоидам. Это показало принципиальное сходство прионов и амилоидов и дало удобную модель для изучения их отличий. В работу также вошел систематический анализ зависимости прионных и амилоидных свойств от первичной последовательности белка, выполненный на искусственных белках, содержащих нолиглутаминовые фрагменты.