Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ / Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Разработка средств и методов серологического мониторинга классической чумы свиней на основе твердофазного иммуноферментного анализа

Диссертация

Автор: Живодеров, Сергей Петрович

Заглавие: Разработка средств и методов серологического мониторинга классической чумы свиней на основе твердофазного иммуноферментного анализа

Справка об оригинале: Живодеров, Сергей Петрович. Разработка средств и методов серологического мониторинга классической чумы свиней на основе твердофазного иммуноферментного анализа : диссертация ... кандидата ветеринарных наук : 16.00.03 Покров, 2007 122 c. : 61 07-16/108

Физическое описание: 122 стр.

Выходные данные: Покров, 2007






Содержание:

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1ВВЕДЕИИЕ
11 Актуальность работы
12 Цель и задачи исследований
13 Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту
14 Научная новизна исследований
15 Практическая значимость исследований
16 Апробация работы
17 Публикации
18 Личный вклад соискателя
19 Структура и объём работы
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
21 Современная таксономия, патогенность вируса
22 Культивирование вируса КЧС in vitro
23 Патогенез, течение и симптомы болезни
24 Природная очаговость
25 Специфическая профилактика
26 Достижения молекулярной биологии вируса и их роль в развитии методов лабораторной диагностики КЧС
27 Средства и методы дифференциальной лабораторной диагностики классической чумы свиней
271 Прямое обнаружение вирусных антигенов
272 КЧС
273 Обнаружение вирусспецифических антител Изоляция и идентификация инфекционного вируса
74 Моноклональные антитела получение и использование для прямого обнаружения вируса
281 Гистохимические методы иммуноферментного анализа
282 Методы твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) для обнаружения антител к вирусу КЧС в пробах сывороток крови
29 Заключение
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
31 Материалы
311 Вирусы
312 Сыворотки
313 Животные
314 Культуры клеток
315 Основные реактивы и приборы
316 Диагностические препараты
32 Методы
321 Культивирование и титрование вируса КЧС
322 Приготовление специфических и нормальных культуральных антигенов
323 Культивирование и титрование рекомбинантного вируса осповакцины
324 Получение сывороток крови
325 Получение моноклональных антител
326 Приготовление иммунопероксидазных конъюгатов
327 Определение концентрации белка
328 Электрофорез и иммуноблоттинг
329 Методы иммунофлуоресценции
0 Реакция нейтрализации флуоресцирующих микробляшек
1 Гистохимический иммуноферментный анализ

Введение:
1.1. Актуальность темы. Классическая чума свиней (КЧС) особо опасная, высоко контагиозная болезнь свиней, эпизоотии и вспышки которой регистрируют как в России, так и за рубежом. Несмотря на тенденцию к снижению количества вспышек болезнь наносит значительный экономический ущерб (6, 76,139,). Противоэпизоотические мероприятия при классической чуме свиней включают диагностику болезни, вакцинацию поголовья, в том числе в повышенных дозах, полное или частичное уничтожение животных в эпизоотическом очаге. Однако, несмотря на проводимые мероприятия в некоторых свинокомплексах установлена стационарность эпизоотических очагов этой болезни (3, 6, 9). Эффективность современной системы защиты свиноводческих хозяйств от классической чумы свиней и меры борьбы с болезнью постоянно подвергаются углубленному анализу и усовершенствованию. В настоящее время в качестве основных звеньев совершенствования противоэпизоотических мероприятий при классической чуме свиней эффективных выдвигаются средств высокоспецифические специфической методы диагностики, оценка профилактики, поствакцинального иммунитета и серологический мониторинг болезни (14, 72, 140). Природная очаговость классической чумы свиней среди диких кабанов представляет опасность возможностью вовлечения домашних свиней в цепь циркуляции возбудителя и угрозу промышленному свиноводству. В связи с этим оценка эффективности специфической профилактики, а именно, определение популяционного иммунитета диких свиней в природе также является актуальным (9,12, 19). В нашей стране основными методам серологического мониторинга, при определении напряженности иммунитета служит реакция нейтрализации (10, 41). Однако, несмотря на ее важное значение, использование реакции нейтрализации для широкомасштабного мониторинга классической чуме свиней и онределения напряженности иммунитета при массовых обследованиях крайне затруднительно ц виду длительности ее постановки, высокой стоимости, необходимостью в специально оснащенных лабораториях стерильные условия, поддержание КК, наличие живого эпизоотического вируса. В настоящее время при решении аналогичных задач предложены методы, основанные на использовании моноклональных антител (Wensvoort G. и др. 1988), имеются коммерческие наборы для определения специфических к вирусу КЧС антител (Ceditest ELISA), SYNBIOTICS (Франция), IDEXX, CYPRESS (Бельгия), однако, эти методы пригодны для качественного определения антител, но не позволяют оценивать напряженность иммунитета. Разработан ряд методов ТФ ИФА, в которых в качестве антигена использовали целую вирусную частицу (73). Несмотря на их высокие чувствительность и специфичность, возможны проблемы, связанные с интерпретацией результатов (134). Также имеются сложности при очистке вируса КЧС. Применение в качестве антигена в методах ТФ ИФА рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС исключает эти проблемы. На основании вышеизложенного совершенствование и разработка высокопроизводительных средств и методов на основе рекомбинантного белка Е2 ВКЧС для широкомасштабного серологического обследования большого количества свиноводческих хозяйств и определения напряженности иммунитета при классической чуме свиней является актуальным. 1.2. Цели и задачи. Основная цель наших исследований заключалась в разработке средств и методов для проведения серологического мониторинга и определения напряженности иммунитета при классической чуме свиней на основе ТФ ИФА. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 10 Определить оптимальные условия получения антигенов вируса классической чумы свиней, их концентрирования и очистки для использования в методах ТФ ИФА. Разработать тест-систему на основе моноклональных антител (МЛ) для технологического контроля активности протективных антигенов вируса классической чумы свиней. Разработать тест-систему с использованием рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней, экспрессируемого вирусом осповакцины для выявления антител к вирусу классической чумы свиней в сыворотках крови свиней. Определить чувствительность, специфичность и коэффициент корреляции результатов разработанного непрямого метода ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 по отношению к результатам РН. Оценить эффективность разработанного "Набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС" при проведении серологического мониторинга и определения напряженности иммунитета свиней при классической чуме свиней в условиях свинокомплексов и охотхозяйств. 1.3. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту: Прямой метод ТФ ИФА на основе моноклональных антител для технологического контроля при получении протективных антигенов вируса классической чумы свиней и определение условий оптимального накопления, концентрирования, очистки рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней. Непрямой метод ТФ ИФА для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней в сыворотках крови свиней с 11 использованием в качестве антигена рекомбинантного белка Е2 вируса классической чумы свиней, экспрессируемого вирусом осповакцины и конъюгата моноклональных антител к Ig G свиней. Чувствительность и специфичность разработанного непрямого метода ТФ ИФА и определение корреляции его результатов полученными с использованием РН. "Набора препаратов для выявления специфических антител к вирусу классической чумы свиней непрямым методом ТФ ИФА на основе с результатами рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС" при проведении серологического мониторинга классической чумы свиней в практике полевых исследований на свинокомплексах и в охотхозяйствах. 1.4.. Научная новизна исследований. Разработан метод концентрирования и очистки рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС на основе вектора вируса осповакцины. Разработан непрямой метод ТФ ИФА для обнаружения специфических к ВКЧС антител в сыворотках крови свиней, пригодный для проведения серологического мониторинга КЧС. Показана корреляция между результатами выявления антител с помощью разработанного непрямого метода ТФ ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС и РН, изучена диагностическая ценность разработанного непрямого метода ТФ ИФА. 1.5. Практическая значимость исследований. На основании результатов проведенных экспериментов, апробации при проверке полевых материалов и результатов комиссионных испытаний разработанный непрямой метод ТФ ИФА рекомендован для определения напряженности иммунитета при КЧС после вакцинации животных на 12 свинокомплексах проведения серологического мониторинга КЧС в свиноводческих хозяйствах и дикой природе. 1.6. Апробация работы. Результаты исследований, выполненных по теме диссертационной и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ работы, доложены ВНИИВВиМ (г.Покров) 2002-2005гг. и Международной научно-практической конференции ВНИТИБП (Щелково, 2005г.) 1.7. Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в т.ч. одна статья в журнале «Ветеринария». 1.8. Личный вклад соискателя Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по