Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ

Варианты патологических клеточных клонов костного мозга при болезнях крови у детей

Диссертация

Автор: Семикина, Елена Леонидовна

Заглавие: Варианты патологических клеточных клонов костного мозга при болезнях крови у детей

Справка об оригинале: Семикина, Елена Леонидовна. Варианты патологических клеточных клонов костного мозга при болезнях крови у детей : диссертация ... доктора медицинских наук : 14.00.00 / Семикина Елена Леонидовна; [Место защиты: Государственное учреждение "Научный центр здоровья детей РАМН"] - Москва, 2003 - Количество страниц: 157 с. Москва, 2003 157 c. :

Физическое описание: 157 стр.

Выходные данные: Москва, 2003






Содержание:

Введение
Глава 1 Современные достижения и проблемы иммуноцитологической диагностики болезней крови у детей (обзор литературы)
11 Характеристика основных кластеров дифференцировки 11 кроветворных и лимфоидных клеток
12 Нормальный состав лимфоидных популяций костного мозга
13 Иммуноцитологические изменения костного мозга при апластической анемии
14 Проблемы иммунофенотипической диагностики острого миелоидного лейкоза
15 Патогенетические и иммуноцитологические особенности миелодиспластического синдрома
Глава 2 Общая характеристика больных и методы исследования
21 Общая характеристика больных
22 Методы исследования
23 Методика исследования иммунофенотипа клеток костного мозга
24 Проточная цитофлюорометрия
Глава 3 Субпопуляции лимфоцитов и клеток-предшественников в костном мозге детей группы сравнения
31 Характеристика лимфоцитарных популяций костного мозга 50 детей группы сравнения
32 Характеристика экспрессии антигенов миелоидных клеток и клеток-предшественников костного мозга детей группы сравнения
Глава 4 Иммуноцитологическая характеристика клеток костного мозга больных приобретенной апластической анемией
41 Клинические особенности обследованных больных
42 Характеристика популяций лимфоцитов костного мозга больных апластической анемией в остром периоде заболевания 64 43 Исследование популяций лимфоцитов костного мозга больных апластической анемией в динамике заболевания
Глава 5 Иммуноцитологическая характеристика патологических клеточных клонов костного мозга при остром лейкозе у детей
51 Иммунофенотипическая характеристика миелоидных лейкозов
52 Особенности экспрессии миелоидных антигенов на бластных клетках острого лимфоидного В-линейного лейкоза у детей
Глава 6 Иммуноцитологическая характеристика мислодиспластического синдрома
61 Клинико-гематологическая характеристика больных МДС
62 Анализ популяций лимфоцитов костного мозга больных миелодиспластическим синдромом
63Анализ экспрессии антигенов миелоидных клеток и клеток-предшественников

Введение:
Актуальность проблемы.
Одним из путей повышения эффективности терапии болезней крови у детей является изучение особенностей их патогенеза. Накопление новых данных позволяет выбрать наиболее обоснованную тактику лечения, целенаправленно воздействовать на ключевые этапы патогенеза. При многих тяжелых, сложных для диагностики и терапии заболеваниях, таких как апластическая анемия, острый лейкоз, миелодиспластический синдром, развитие болезни связано с появлением и развитием аномальных клонов клеток, которые вытесняют или подавляют нормальный гемопоэз. При этом уровень поражения кроветворения достаточно высокий, процесс затрагивает стволовые клетки или ранние предшественники. Однако в большинстве случаев сохраняются и нормальные клетки-предшественники, и тактика лечения разрабатывается с целью уничтожения патологических элементов и создания условий для восстановления нормального кроветворения. Использование одной из самых современных исследовательских технологий - метода иммунофенотипирования - позволяет охарактеризовать клетку по ее функциональным рецепторам. Возможность найти таким образом критерии различия морфологически недифференцируемых нормальных и патологических клеток определяет большой интерес исследователей к применению этого метода в гематологии (Барышников А.Ю., 1984; Jennings С., 1997 и др.).
С расширением спектра изучаемых мембранных антигенов бластных клеток при остром лейкозе у детей значительно возросла частота выявления неродственных антигенов, значительная часть которых представлена маркерами миелоидной дифференцировки. Разработка критериев дифференциальной диагностики гибридных (бифенотипических) вариантов заболевания особенно актуальна не только для часто встречающихся случаев экспрессии миелоидных антигенов при остром лимфобластном лейкозе (Crist W., 1992; Uckum F., 1997; Алейникова О.В., 1999; Ленская Р.В., 1999;
El Safy U., 2000), но также в дифференциальной диагностике различных вариантов острого миелобластного лейкоза (Drexler Н., 1993; Гальцева И.В., 1997; Ugur N., 1998; Тупицын H.H., 1999). Продолжается поиск иммунофенотипических признаков, которые позволили бы проводить мониторинг резидуальных бластов (Drach J. 1992, Jennings С.,1997).
Апластическая анемия с современной точки зрения расценивается как заболевание с иммунным патогенезом, который может быть связан с аномальными функциональными особенностями морфологически нормальных лимфоцитов. Однако клинические и иммунологические характеристики этого заболевания очень разнообразны, что приводит исследователей к мысли о неоднородности патогенеза апластической анемии. (Kagan W., 1976; Zoumbos N., 1985; Торубарова H.A., 1987). Анализ функциональных рецепторов лимфоидных клеток является наиболее перспективным методом исследования этой проблемы.
Изучение миелодиспластического синдрома, имеющего черты сходства и с апластической анемией, и с лейкозом, выявило клональные аномалии эритроидных и миелоидных клеток, мегакариоцитов, и - в редких случаях -лимфоцитов. Предполагается, что трансформация происходит на уровне полипотентной стволовой клетки, что в дальнейшем приводит к невозможности ее нормальной дифференцировки в зрелые клетки крови (Janssen J., 1989; Hasle Н., 1995; Tweel van den, J., 1995). Современные данные о патогенезе миелодиспластического синдрома позволяют предположить мозаичный характер кроветворения, когда гемопоэз представлен как генетически нестабильным клоном, так и нормальными кроветворными элементами. Вызывает большой интерес изучение механизмов развития нестабильного клона и его трансформации в лейкемический клон, а также роль иммунной системы в этом процессе. Поэтому анализ функциональных рецепторов костномозговых клеток является одним из наиболее перспективных методов, способных дать новую информацию о патогенезе миелодиспластического синдрома.
Цель работы: охарактеризовать патологические клеточные клоны костного мозга при патогенетически различных болезнях крови у детей на основании анализа функциональных рецепторов клеточной мембраны по количественным параметрам и уровню экспрессии антигенов. Задачи:
1. Изучить характеристики мембранных рецепторов клеток-предшественников костного мозга у детей без поражения кроветворения (группа сравнения);
2. Получить характеристики лимфоцитов костного мозга у детей без поражения костномозгового кроветворения (группа сравнения);
3. Оценить состояние мембранных рецепторов лимфоцитов костного мозга при различных формах апластической анемии у детей, определить характеристики патологических клонов при этом заболевании;
4. Проследить динамику патологических клонов у больных апластической анемией при восстановлении гемопоэза;
5. Охарактеризовать патологические клоны костного мозга при различных вариантах острого миелобластного лейкоза у детей;
6. Выявить различия в экспрессии миелоидных антигенов и антигенов клеток-предшественников при остром миелобластном лейкозе и остром лимфобластном лейкозе с миелоидными маркерами;
7. Охарактеризовать экспрессию миелоидных антигенов и антигенов клеток-предшественников при миелодиспластическом синдроме у детей в сравнении с острым миелобластным лейкозом;
8 Оценить состояние лимфоидных популяций костного мозга при миелодиспластическом синдроме у детей.
Научная новизна исследования:
На основании анализа частоты встречаемости мембранных антигенов и интенсивности их экспрессии впервые получены иммунофенотипические характеристики клеток-предшественников костного мозга детей при нормальном кроветворении.
По результатам изучения лимфоидных популяций костного мозга детей при нормальном кроветворении выработаны критерии оценки участия иммунных клеток в патогенезе поражения кроветворения при апластической анемии. Впервые описаны значительные различия в иммунофенотипической картине лимфоидных популяций костного мозга больных апластической анемией разной степени тяжести. У детей с крайне тяжелой апластической анемией признаки активации иммунных популяций обнаруживаются крайне редко (1 больной из 9). При тяжелой апластической анемии у 60% больных в костном мозге определяется присутствие функционального патологического клона активированных супрессорно-цитотоксических лимфоцитов: резкий сдвиг соотношения Т-хелперов и Т-супрессоров (СБ4:С08<0,5) и высокая экспрессия антигенов активации на Т-лимфоцитах (более 10% клеток с иммунофенотипом СОЗ+ОЯ+, С08+БЯ+, СОЗ+СБ16^/56+). Установлено, что восстановление кроветворения при полной или частичной ремиссии апластической анемии сопровождается исчезновением активированных Т-лимфоцитов при сохранении высокого уровня супрессорно-цитотоксических клеток. Больные нетяжелой апластической анемией не имеют признаков присутствия патологических клонов иммунных клеток в костном мозге ни в остром периоде, ни в периоде ремиссии.
Впервые показано, что особенностью бластных клеток миелоидных вариантов острого лейкоза является высокая интенсивность экспрессии антигенов миелоидной линии дифференцировки СБЗЗ и СБ13, которая в 4-5 раз превышает интенсивность их экспрессии на мембране нормальных миелоидных предшественников, и в 3 раза превышает интенсивность аберрантной экспрессии этих маркеров на бластных клетках острого лимфоидного лейкоза.
Антиген ранних предшественников СБ34 обнаружен на бластных клетках у 56% больных острым миелоидным лейкозом, при этом интенсивность его экспрессии в 5 раз превысила аналогичный показатель нормальных клеток-предшественников.
Выявлена неоднородность иммунофенотипа клеток костного мозга при миелодиспластическом синдроме, что соответствует клинико-морфологическому полиморфизму этого заболевания. Наиболее однородную группу в составе миелодиспластического синдрома представляют больные с вариантом НАЕВ^). У этих больных вместе с увеличением в костном мозге процента клеток с миелоидными антигенами интенсивность их экспрессии значительно возрастает и приближается к показателям миелобластов при остром лейкозе. В работе впервые охарактеризована интенсивность экспрессии антигенов С034 и НЬА-ОЯ при ЯАЕВ^). Установлено, что эти показатели соответствуют характеристикам нормальных клеток-предшественников. Показано, что признаков активации иммунных клеток в костном мозге больных МДС нет.
Практическая значимость работы: Применение иммунофенотипического исследования вместе с морфологическим позволяет значительно улучшить диагностику патологических клонов костного мозга при болезнях крови у детей. Приведенная в работе характеристика популяций костномозговых клеток у детей без поражения кроветворения (группа сравнения) определяет нормальный иммуноцитологический состав костного мозга, что может быть использовано в практической гематологии.
Результаты исследований позволили получить патогенетическое обоснование иммуносупрессивного лечения тяжелой формы апластической анемии, разработаны иммунофенотипические критерии для контроля за результатом лечения - сдвиг равновесия популяций Т-хелперов и Т-супрессоров и экспрессия антигенов активации.
Выявленные различия в показателях экспрессии миелоидных антигенов и антигенов клеток-предшественников имеют большое значение для дифференциальной диагностики гибридных вариантов острого лейкоза, а
10 также могут быть использованы для контроля полноты ремиссии при миелоидных вариантах.
Внедрение в практику: Разработанные принципы диагностики патологических клеточных клонов костного мозга внедрены в работу отдела гематологии НИИ педиатрии ГУ НЦ ЗД РАМН, в диагностическую работу отделения гематологии ГУЗ «Областная детская клиническая больница» г.Воронежа, в практическую работу отделения детской гематологии Республиканского онкологического диспансера г. Нальчика. Принципы компьютерного анализа и диагностики клеточных клонов включены в курс лекций и практических занятий на кафедре «Биомедицинские технические системы (БМТ-1)» факультета биомедицинской техники Московского государственного технического университета им. Н.Э.Баумана.
Материалы диссертации доложены на I и II Российской конференции по детской гематологии "От науки к практике" (Санкт-Петербург, 1995 и 1999); 17 Конгрессе Международного общества по детской онкологии XXVII SIOP Meeting (Vienna, Austria, 1996); на III и VII Российских национальных Конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1996 и 2000); на научно-практической конференции "Фармакотерапия и фармакогенетика в педиатрии" (Москва, 2000); на совещании рабочей группы ESPHI Working Group (Lucca, Italy 2000); на 18 Конгрессе Европейского общества по детской гематологии и иммунологии XVIII Congress ESPHI (Luzerne/Switzerland, 2001); на симпозиуме «Биологические основы терапии онкогематологических заболеваний» (Москва, 2001); а также на рабочих совещаниях по проточной цитометрии «BD FACS Users Meeting» (Санкт-Петербург, 2001 и 2002).