Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ / Агрономия / Защита растений

Вредоносность латентных вирусов на груше и их диагностика методами ИФА и ПЦР

Диссертация

Автор: Саунина, Ирина Ивановна

Заглавие: Вредоносность латентных вирусов на груше и их диагностика методами ИФА и ПЦР

Справка об оригинале: Саунина, Ирина Ивановна. Вредоносность латентных вирусов на груше и их диагностика методами ИФА и ПЦР : диссертация ... кандидата сельскохозяйственных наук : 06.01.11 / Саунина Ирина Ивановна; [Место защиты: Всерос. селекц.-технол. ин-т садоводства и питомниководства] - Москва, 2009 - Количество страниц: 116 с. ил. Москва, 2009 116 c. :

Физическое описание: 116 стр.

Выходные данные: Москва, 2009






Содержание:

ВВЕДЕНИЕ
Цель исследований
Задачи исследований
Научная новизна результатов исследований
Предмет исследований
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Видовой состав и распространенность вирусов на груше
12 Влияние вирусов на продуктивность и биохимические показатели у плодовых культур
13 Действие иммуностимуляторов на фитопатогены
14 Методы диагностики вирусов
141 Диагностика вирусов методом иммуноферментного анализа
142 Диагностика вирусов методом полимеразной цепной реакции
1421 Оптимизация параметров ОТ-ПЦР
1422 Модификации ПЦР
1423 Диагностика вирусов на груше методом ПЦР
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
21 Время, место проведения исследований
22 Метеорологические условия в годы проведения экспериментов
23 Методика исследований
231 Объекты исследований
232 Характеристика изучаемых вирусов
233 Характеристика изучаемых сортов
234 Характеристика иммуностимуляторов
235 Элементы учёта и наблюдений
236 Краткие схемы опытов
237 Методики тестирования растительных образцов на наличие вирусов
2371 Методика ИФА
2372 Методика ПЦР
238 Методика количественного определения хлорофилла
239 Методика определения активности пероксидазы
2310 Методика изучения антивирусных свойств препаратов рибав-экстра и циркон
2311 Методика изучения действия иммуностимуляторов на продуктивность деревьев!
2312 Статистический анализ результатов исследований
2313 Расчет экономической эффективности результатов исследований
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
31 Распространенность латентных вирусов на груше в
Московской области
32 Совершенствование методов диагностики вирусов на груше
321 Совершенствование метода ИФА
322 Совершенствование метода ОТ-ПЦР
323 Сравнительная оценка ИФА и ПНР
33 Вредоносность вирусных болезней
34 Изучение действия иммуностимуляторов на латентные вирусы и содержание хлорофилла в листьях груши
341 Изучение антивирусного действия иммуностимуляторов
342 Влияние иммуностимуляторов на содержание хлорофилла в листьях зараженных вирусами растений груши
35 Изучение действия иммуностимуляторов на продуктивность деревьев груши
ГЛАВА 4 ЭКОНОМИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ
41 Экономическая оценка ИФА и ОТ- ПНР
42 Экономическая оценка применения иммуностимуляторов в саду
ВЫВОДЫ,
РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

Введение:
Груша является одной из ведущих плодовых культур умеренного пояса, занимает второе место в мировом производстве плодов листопадных плодовых культур, уступая только яблоне. По данным ФАО, в мире ежегодно производится около 9-10 млн. тонн плодов груши на площади 1,7 млн. га. В России груша выращивается на площади 18 тыс. га с валовым сбором около 100 тыс. тонн (www.fao.org4). из них около 40 % производится в Европе: Италии, Франции, Испании и Германии. Из-за меньшей по сравнению с яблоней зимостойкости груша более требовательна к выбору зон для промышленного возделывания. Однако пищевая ценность плодов груши так высока, что ее пытаются выращивать в самых разнообразных, даже не подходящих для нее почвенно-климатических зонах. Например, в Российской Федерации ареал возделывания груши простирается от западных границ до Дальнего Востока (Туз, 1974).
Плоды десертных сортов груши отличаются маслянистой, сочной консистенцией мякоти, непревзойденным тонким ароматом и вкусом, привлекательным внешним видом. Наличие сортов с разными сроками потребления позволяет использовать свежие плоды груши 8-10 месяцев, а при современных методах хранения - практически круглый год. Деревья груши долговечны, при хорошем уходе грушевые сады прекрасно плодоносят десятки лет.
Плоды груши используются для различных видов переработки. Из них готовят варенье, компоты, повидло, грушевый мед (бекмес), соки и вина, а также сушат.
Народная медицина использует варенье, печеные плоды груш, отвар из сушеных груш, грушевый сок как диетические, профилактические и лекарственные продукты при различных заболеваниях.
Дикорастущие виды и формы груши используются в садоводстве в качестве семенных подвоев и для озеленения населенных пунктов (Душустина, 1979).
Древесина груши отличается твердостью и высоким удельным весом, имеет красивую красновато-коричневую окраску, используется в мебельной промышленности.
Деревья груши характеризуются меньшей по сравнению с яблоней периодичностью плодоношения, что частично связано с многоцветковостыо соцветий груши (Ефимова, Гиричев, 2005). Груша обладает высоким адаптационным потенциалом и способна занять достойное место в насаждениях плодовых культур средней полосы России (Каталог мировой коллекции ВИР, 1991). Поэтому в последнее время груша приобретает все большую популярность и в условиях Нечерноземной зоны России.
Одним из главных факторов, препятствующих распространению груши, является недостаток оздоровленного посадочного материала, а также слабая изученность вопросов вредоносности вирусов и эффективных способов оздоровления от них. Вирусные и фитоплазменные заболевания ввиду хронического порядка и высокой вредоносности считаются важнейшим лимитирующим фактором повышения общей урожайности плодовых культур, в том числе и груши.
Основным направлением борьбы с этими заболеваниями является перевод питомниководства на безвирусную основу и введение системы сертификации посадочного материала, что принято в большинстве европейских стран.
За последние годы мировой наукой достигнут существенный прогресс в изучении вирусных болезней плодовых культур. Отчасти это связано с разработкой высокочувствительных серологических и молекулярных методов диагностики. Однако ввиду ряда объективных факторов (латентный характер заражения растений большинством вирусов, отсутствие экспресс-ме-/ тодов диагностики для ряда возбудителей и т.д.) существующие методы диагностики не всегда показывают хорошие результаты. Дальнейшие исследования должны быть направлены на поиск решений, позволяющих быстро и качественно диагностировать вирусные болезни. Актуальность исследований в этом направлении заключается в необходимости совершенствования методов диагностики (ИФА и ПНР) применительно к биологическим особенностям груши.
В связи с выше изложенным нами определены следующие цель и задачи исследований.
Цель исследований - изучить распространенность и вредоносность латентных вирусов на груше и особенности их диагностики с использованием ИФА и ПЦР.
Задачи исследований:
1. Изучить распространенность латентных вирусов на груше;
2. Установить вредоносность вирусов на груше путем оценки действия вирусов на продуктивность и биохимические показатели растений;
3. Усовершенствовать методы диагностики (ИФА, ПЦР) вирусов на груше;
4. Установить действие иммуностимуляторов (рибав-экстра и циркон) на вирусы, биохимические показатели и продуктивность деревьев груши.
Методология настоящих исследований заключается в поиске путей решения проблемы снижения вредоносности вирусов на груше и повышения эффективности и достоверности диагностики методов ИФА и ПЦР.
Научная новизна результатов исследований
Впервые разработана методика полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) при тестировании груши на вирусы хлоротической пятнистости листьев яблони (АСЬ8У), бороздчатости древесины яблони (АБСУ) и ямчатости древесины яблони (АБРУ). Для повышения эффективности выявления вирусной инфекции установлена необходимость использования на этапе экстракции РНК гидроксипроизводного бензойной кислоты и модифицированного метода сорбции вирусов на препарате силика. На разработанный метод подана заявка на патент № 2008152268 от 30.12.2008 г.
Установлена локализация вирусов по побегу в зависимости от расположения листьев. Показано негативное влияние латентных вирусов на продуктивность и биохимические показатели у груши.
Впервые выявлено антивирусное действие иммуностимуляторов рибав-экстра и циркон в отношении латентных вирусов на груше, предложена методика по его оценке. Установлено положительное действие этих препаратов на продуктивность деревьев груши в саду.
Практическая значимость и реализация результатов исследований
Предложен новый высокоэффективный способ экстракции РНК вирусов из листьев груши для последующей надежной диагностики вирусной инфекции методом полимеразной цепной реакции.
Разработанный способ диагностики внедрен в условиях лаборатории вирусологии ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии и прошел успешные испытания в фирме «Агродиагностика», где показано повышение эффективности выявления вирусов при выполнении ОТ-ПЦР по предложенному способу на 25 % в сравнении с известным.
Оптимизирована методика выполнения ИФА с учетом выявленных закономерностей распределения вирусов по органам и тканям груши и длительности ферментативной реакции. Указанная методика используется при тестировании груши на вирусы в условиях лаборатории вирусологии ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии.
Показана эффективность применения препаратов рибав-экстра и циркон в производственных условиях отдела испытания новых технологий ВСТИСП на площади 1 га.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Совершенствование методов иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции для тестирования на латентные вирусы груши.
2. Обоснование необходимости проведения посадок насаждений груши свободным от латентных вирусов посадочным материалом.
3. Обоснование целесообразности применения иммуностимуляторов в саду.
Предмет исследований:
Предметом исследований являются зависимость распространённости и вредоносности вирусов от местоположения насаждений и сортовых особенностей груши, а также эффективности диагностики вирусов от используемого метода и вида тест- образца.
Апробация работы Основные материалы диссертации доложены на VII молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» в РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева (4 апреля 2007 г.) и Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые -садоводству России в XXI веке» (г. Москва, 11-12 октября 2007 г.).
Публикации
Основные результаты исследований по диссертации изложены в 4 научных работах, в том числе 2 - в рецензируемых научных журналах.
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 116 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов, рекомендаций по практическому использованию, списка литературы из 157 источников, в том числе 105 - на иностранных языках, содержит 29 таблиц и 14 рисунков.