Цена доставки диссертации от 500 рублей 

Поиск:

Каталог / БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ / Микробиология

Закономерности формирования резистентности к антибиотикам тетрациклинового ряда у урогенитальных микоплазм, персистирующих в организме человека

Диссертация

Автор: Тараскина, Анастасия Евгеньевна

Заглавие: Закономерности формирования резистентности к антибиотикам тетрациклинового ряда у урогенитальных микоплазм, персистирующих в организме человека

Справка об оригинале: Тараскина, Анастасия Евгеньевна. Закономерности формирования резистентности к антибиотикам тетрациклинового ряда у урогенитальных микоплазм, персистирующих в организме человека : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.07 - Москва, 2003 - Количество страниц: 151 с. ил Москва, 2003 151 c. :

Физическое описание: 151 стр.

Выходные данные: Москва, 2003






Содержание:

Список сокращений
Введение
Глава 1 Обзор литературы Адаптационные потенции урогенитальных микоплазм к антибактериальным препаратам
11 Общая характеристика микоплазм урогенитального тракта
111 История открытия, филогенетическое положение микоплазм и классификация
112 Структурно-функциональные особенности молликут
1121 Морфологическая характеристика
1122 Возможности метаболизма (биосинтетические свойства)
1123 Некоторые аспекты геномики молликут
1124 Феномен антигенной изменчивости микоплазм
113 Распространенность молликут в природе
1131 Микоплазменные заболевания человека
1132 Урогенитальные микоплазмы - как условно-патогенные микроорганизмы
12 Феномен антибиотикорезистентности микроорганизмов в клинической практике
121 Механизмы возникновения устойчивости к основным группам антимикробных агентов, используемых для элиминации молликут
1211 Некоторые аспекты появления тетрациклиновой резистентности у микоплазм:
1212 Формирование антибиотической сопротивляемости в отношении препаратов MLS-группы и фторхинолонового ряда
13 Микробиоценоз урогенитального тракта - как динамически лабильная система
13 [Функциональное значение основных групп микроорганизмов, потенциально регистрируемых в профиле микрофлоры половых путей
Глава 2 Материалы и методы исследования
21 Клиническая характеристика обследованных женщин
22 Особенности методики исследования
23 Антибактериальные препараты
24 Схема выделения в культуре клинических изолятов урогенитальных микоплазм
25 КультивированиеМкот1т$
26 Культивирование иигеЫуИсит
27 Бактериологический анализ
28 Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК)
29 Культивирование клеток линии McCoy
210 Выделение ДНК из культур микроорганизмов, колонизирующих урогенитальный тракт человека
211 Определение различных фрагментов конъюгативного транспозона Тп916 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР)
212 ПЦР-анализ идентификации Мhominis и Uurealyticum
213 Анализ аллельного полиморфизма tetM детерминанты
214 Метод определения полиморфизма ДНК при амплификации с произвольным праймером (RAPD)
Глава 3 Результаты и обсуждение
31 Феномен резистентности к антибактериальным препаратам клинических изолятов Mycoplasma hominis, установленный среди пациенток Санкт-Петербурга
32 Характеристика аллельного полиморфизма (мозаичности) гена tetM клинических изолятов Мhominis, устойчивых к антибактериальным агентам тетрациклинового ряда
33 Определение основных закономерностей дрейфа tetM детерминанты (in vivo) в микробиоценозе урогенитального тракта с участием микоплазм при действии антимикробного агента тетрациклинового ряда
331 Общие тенденции трансформации микробиоценоза урогенитального тракта при действии тетрациклинов
332 Основные предпосылки переноса tetM детерминанты в клетки молликут
333 Случаи (феномены) формирования резистентности к воздействию тетрациклинов in vivo за счет механизмов, альтернативных генетическому переносу tetM детерминанты
34 Особенности адаптации микоплазм к воздействию тетрациклинов in vitro при разных условиях культивирования
35 Оценка изменчивости генома Mhominis при длительной персистенции микоплазм в организме человека
Выводы

Введение:
Актуальность проблемы. Молликуты (микоплазмы) - самые малые из известных микроорганизмов, способных к самостоятельному воспроизведению, наиболее просто организованные прокариоты. Все микоплазмы, встречающиеся в природе, являются комменсалами или паразитами человека, животных, насекомых и растений. По уровню структурной организации микоплазмы можно было бы поместить между вирусами и бактериями, но таксономически микоплазмы отнесены к бактериям (класс Mollicutes). В отличие от большинства бактерий микоплазмы лишены клеточной стенки и не способны синтезировать ее биохимические предшественники. В процессе эволюции молликуты приспособились к тесному сосуществованию с клетками высших эукариот, паразитируя как на мембране, так и в цитоплазме клеток. Микоплазмы располагают, вероятно, минимальным для бактерии количеством генетической информации и, соответственно, минимальным количеством метаболических путей, что определяет их зависимость от клеток высших организмов. Несколько видов микоплазм являются патогенами человека. Они ассоциированны с рядом физиологических расстройств и заселяют, главным образом, слизистые поверхности урогенитального и респираторного трактов. При некоторых состояниях организма человека микоплазмы способны вызывать выраженные патологические изменения воспалительного характера с формированием персистирующей инфекции, которой часто присуще бессимптомное (торпидное) течение с выраженными аутоиммунными осложнениями (Christiansen G. et al., 1997; Razin S. et al., 1998; Раковская И.В. и др., 2000).
В практике акушерства и гинекологии наиболее часто встречаются два вида микоплазм - Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis. Все молликуты урогенитального тракта человека относятся к условно патогенным. В настоящее время доказана этиологическая роль данных микроорганизмов при таких патологических процессах как хронические неспецифические заболевания урогенитального тракта (негонококковые уретриты, вагиниты) (Taylor-Robinson D., Furr P.M., 1997; Прозоровский С.В. и др., 1995). При лечении вагинозов, ассоциированных с присутствием урогенитальных микоплазм, «антибиотиками выбора» традиционно считаются препараты тетрациклинового ряда. Эти антимикробные агенты являются наиболее эффективными, приносящими минимальный вред организму человека побочным действием, и широко используются в терапии микоплазмозов.
За последнее десятилетие возросло относительное количество клинических изолятов урогенитальных микоплазм, устойчивых к антибиотикам тетрациклинового ряда. Кроме того, возросла минимальная ингибирующая концентрация (МИК) тетрациклина, доксициклина и клиндамицина для клинических изолятов M.hominis и U.urealyticum (Cumming М.С., McCormack W.M., 1990; Roberts M.C., 1990; Цой Е.Г. и др., 1999).
Приобретение микоплазмами (как и другими микроорганизмами) резистентности к антибиотикам тетрациклинового ряда исследователи до настоящего времени объясняют естественной трансформацией микоплазм -горизонтальным переносом детерминанты резистентности tetM в составе конъюгативного транспозона Тп916 от устойчивых к тетрациклинам бактерий-доноров. Продукт гена tetM связывается с ЗОБ-субъединицей рибосомы, предотвращая взаимодействие с ней тетрациклина, но при этом не мешает взаимодействию аминоацил-тРНК со специфическим участком рибосомы -таков один из известных молекулярных механизмов возникновения устойчивости бактерий к тетрациклинам. Конъюгативный транспозон Тп916 широко распространен среди разных микроорганизмов, таких как стрептококки и бактероиды, и обнаружен также у вибрионов и энтеробактерий. В экспериментальных условиях он передаётся от клеток доноров к реципиентам с высокой частотой: 10"4- 10"5 на клетку на поколение (Poyart C.et al., 1995; Rice L.B., 1998). Известно, что микоплазмы также способны приобретать tetM детерминанту в составе Тп916 в результате их совместного культивирования с бактериями вида Enterococcus faecalis (Roberts M.C., Kenny G.E., 1987; Dybvig K., 1990). He все виды микроорганизмов могут выступать в роли доноров из-за ряда функциональных особенностей. Некоторые бактерии акцептируют в свой геном tetM без участков, ответственных за транспозиционые функции. Соответственно, они не имеют потенциальной возможности к дальнейшему распространению конъюгативных элементов.
Ранние исследования формирования резистентности к действию тетрациклинов у молликут заключались в следующем. В условиях in vitro определялись условия конъюгативного переноса транспозона Тп916 от бактерий доноров к реципиентам, в результате скрещивания (полового процесса), или изучалась трансформация клеток микоплазм плазмидами, содержащими транспозон Тп916, с использованием полиэтиленгликоля. Рассмотрение вопросов возникновения устойчивости к тетрациклинам в клинической практике были сведены только к скрининговым исследованиям распространенности tetM детерминант в урогенитальном тракте женщин или к определению МИК для клинических изолятов М.hominis или U.urealyticum.
Следует отметить, что эксперименты in vitro не позволяют оценить все факторы, влияющие на процесс передачи гена tetM, ответственного за возникновение толерантности к тетрациклинам, в клетки микоплазм, которые встречаются в естественных физиологических условиях (в микробиоценозе женщин). К числу таких факторов относятся: количество бактерий - доноров детерминант устойчивости, наличие воспалительного процесса на эпителиальных тканях, pH среды и другие возможные факторы. Кроме того, клинические наблюдения за исходом лечения, позволяют констатировать, что антибиотикотерапия, приводящая к клиническому выздоровлению, часто не связана с элиминацией возбудителя из организма, и следовательно, лишь способствует переходу острой формы инфекции в латентную.
Таким образом, предпосылки возникновения резистентности к антибактериальным препаратам тетрациклинового ряда у микоплазм, персистирующих в организме человека, не изучены в полной мере, поэтому их изучение продолжает быть актуальным. Мы предполагаем, что проведение мониторинга за персистирующими штаммами молликут в ходе антибиотикотерапии в условиях in vivo (в вагинальном биоценозе) позволит определить основные факторы формирования толерантности этих микроорганизмов к антимикробному воздействию.
Цель исследования: изучение закономерностей формирования резистентности к антимикробным агентам тетрациклинового ряда у Mycoplasma hominis in vivo.
В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить резистентность клинических изолятов M.hominis, выделенных от пациенток НИИ АГ им.Отта г.Санкт-Петербурга, к антибактериальным препаратам (тетрациклинового, фторхинолонового ряда и MLS-группы), наиболее широко используемых для элиминации микоплазм.
2. Охарактеризовать аллельный полиморфизм teiM (мозаичность гена tetM) у клинических изолятов M.hominis и выявить микроорганизмы-доноры конъюгативного транспозона, носителя гена teiМ.
3. Исследовать перенос te?M детерминанты в клетки урогенитальных микоплазм на фоне структурных изменений микробиоценоза вагины при лечении пациентов доксициклином.
4. Установить корреляцию между возрастанием минимальной ингибирующей концентрации (МИК) к препаратам тетрациклинового ряда и изменениями параметров культивирования клинических изолятов M.hominis в условиях in vitro.
5. Оценить изменчивость геномов M.hominis при длительной персистенции микоплазмы в организме человека с использованием метода определения полиморфизма геномной ДНК при амплификации с произвольным праймером (RAPD).